敲低ACC1对胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制研究

作者：张琳; 钱河; 赵宝生; 高曼棋; 刘玉珍^*

来源：中国应用生理学杂志, 2022, 38(06): 745-753.

• 胶质瘤
• ACC1
• 组蛋白乙酰化
• PAI-1
• 细胞培养
• 迁移

目的:探讨敲低ACC1对人胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制。方法:选用人胶质瘤U251细胞系。实验分为三部分，实验一：通过慢病毒转染建立稳定低表达ACC1的U251细胞株(shACC1)及其对照(NC),Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移，WB检测ACC1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达；实验二：探索并验证敲低ACC1后下游关键分子PAI-1表达量升高。应用其抑制剂PAI-039处理细胞，Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移，WB检测ACC1、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达；实验三：探索敲低ACC1调节PAI-1的分子机制，检测细胞乙酰辅酶A水平及组蛋白H3乙酰化。使用乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞，Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移，WB检测ACC1、H3K9ac、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达，RT-qPCR检测PAI-1 mRNA水平；每项实验重复三次。结果:实验一：对胶质瘤U251细胞进行慢病毒转染，WB结果显示，与NC组相比，shACC1组ACC1表达水平显著降低，提示慢病毒转染成功(P<0.01),shACC1组迁移细胞数明显增多(P<0.01),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调，E-cadherin表达下调(P<0.01);实验二：与NC组相比，shACC1组PAI-1 mRNA水平上调；进一步使用PAI-1的抑制剂PAI-039,与对照组相比，shACC1+PAI-039组细胞迁移数减少，且呈浓度依赖性(P<0.01),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调，E-cadherin表达下调(P<0.01);实验三：与NC组相比，shACC1组乙酰辅酶A浓度显著增加(P<0.01),H3K9ac表达水平明显升高(P<0.01);进一步使用组蛋白乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞后，PAI-1 mRNA水平下降，与对照组相比，shACC1+C646组细胞迁移数减少，且呈浓度依赖性(P<0.01),H3K9ac表达水平降低，迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调，E-cadherin表达下调(P<0.01);结论:敲低ACC1通过增加组蛋白乙酰化修饰水平上调PAI-1促进人胶质瘤U251细胞的迁移。

• 单位
  新乡医学院第一附属医院