基于Nrf 2/HO-1启动子筛选抗水生病毒药物的方法

作者：王靖雯; 吴苗苗; 李莉娟; 顾泽茂; 袁军法^*

来源：水产学报, 2023, 1-11.

• 黑头软口鲦上皮细胞(FHM)
• Nrf2
• HO-1
• 启动子
• 转录调控
• 抗病毒药物筛选

为建立基于Nrf2、HO-1启动子活性的抗病毒药物筛选方法，实验以黑头软口鲦上皮细胞系（FHM）为材料，构建Nrf2、HO-1启动子重组质粒，利用双荧光素酶报告系统检测不同浓度（0、3.1、6.3、12.5、25.0、50.0 μg/mL）的白藜芦醇、水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素对启动子活性的影响，并利用鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus，SVCV）和蛙虹彩病毒（rana grylio iridovirus，RGV）验证阳性药物的抗病毒效果。结果显示，Nrf2、HO-1启动子序列中存在FOX家族、IRF家族等多种转录因子的结合位点，并分别存在1个和3个与甲基化相关的CpG岛。双荧光素酶报告实验显示，水飞蓟宾、穿心莲内酯及姜黄素可激活Nrf2、HO-1启动子。药物浓度梯度实验表明，6.3 μg/mL的姜黄素和穿心莲内酯可显著上调Nrf2和HO-1的启动子活性。病毒感染后的细胞病变效应、病毒的复制及病毒滴度结果均证明姜黄素和穿心莲内酯可抑制SVCV和RGV的感染。综上，本实验建立的pGL3-Nrf2和pGL3-HO-1启动子报告质粒，可用于抗水生病毒药物的筛选，也为Nrf2、HO-1转录调控机制的研究提供了工具。

• 单位
  华中农业大学