摘要
目的探讨慢病毒介导的Notch1表达下调对病理瘢痕成纤维细胞(PSF)中caspase-9活化水平及线粒体膜电位的影响。方法分离培养增生性PSFs,感染Notch1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒。分别采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中Notch1mRNA和蛋白表达; MTT法检测细胞增殖; PI单染法检测细胞周期; Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡; Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、活化的caspase-3(c-caspase-3)和caspase-9(c-caspase-9)蛋白及胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白; JC-1法检测细胞线粒体膜电位。结果 Notch1 siRNA慢病毒感染后的PSFs中Notch1表达水平明显低于阴性对照慢病毒和未感染的PSFs的表达水平(P<0. 05)。下调Notch1后的PSFs增殖能力降低(P<0. 05);细胞G0/G1期比例升高(P<0. 05);细胞凋亡率升高(P<0. 05); c-caspase-3和c-caspase-9蛋白表达升高(P<0. 05);细胞线粒体膜电位明显下降(P<0. 05);细胞中cyclin D1和CDK4蛋白水平降低(P<0. 05);胞质内的cytochrome C蛋白含量升高(P<0. 05)及线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0. 05)。结论 Notch1表达下调抑制PSFs增殖并诱导凋亡。
-
单位鄂州市中心医院