人丝氨酸-苏氨酸激酶1过表达慢病毒细胞株构建以及功能检测

作者：徐卿; 李洪涛; 林峰; 姚阳

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(02): 323-325.

• 骨肉瘤
• 丝氨酸-苏氨酸激酶1

目的构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的丝氨酸-苏氨酸激酶1(LKB1)慢病毒过表达细胞株,观察其在哺乳动物细胞内的表达和定位以及相关功能影响。方法构建出慢病毒表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体(pCDH-LKBI)并筛选慢病毒细胞株。运用免疫荧光及Western blot检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达。同时使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LKBl对细胞活性的影响。结果成功构建LKB1慢病毒细胞株,荧光定位实验表明LKB1在人成骨肉瘤细胞细胞的细胞质细胞核均有分布;Western blot法检测表明LKB1在真核细胞中能有效表达。CCK-8检测显示,转染48h后,对照组1.131±0.003,LKB1组0.739±0.051,LKB1组相比于对照组,活性降低,两组差异有统计学意义(P=0.001)。结论成功构建过表达带绿色荧光蛋白标签的LKB1蛋白(GFP-LKBI)的细胞株,LKB1过表达明显抑制肿瘤细胞的活性。

• 单位
  上海交通大学; 苏州大学