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摘要
目的研究维生素D类似物paricalcitol激活维生素D受体/谷胱甘肽过氧化物酶4(VDR/GPX4)通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用。方法将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、大潮气量(HVT)致VILI模型组(HVT组)、paricalcitol对照组(P组)和paricalcitol预处理组(P+HVT组), 每组6只。给予小鼠气管插管, 按40 mL/kg的潮气量通气制备VILI模型;对照组仅气管插管, 不予通气。P+HVT组小鼠于制模前1周腹腔注射paricalcitol 0.2 μg/kg, 每日1次;P组仅在实验前1周腹腔注射paricalcitol 0.2 μg/kg, 每日1次。通气4 h后处死小鼠取肺组织, 通过肺湿/干质量(W/D)比值、苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色评价肺损伤情况;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和免疫组化法检测VDR、GPX4的表达;采用微量法检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果 HVT通气4 h后小鼠出现明显肺损伤, 表现为:与对照组相比, 肺损伤评分和肺W/D比值明显升高〔肺损伤评分(分):0.430±0.035比0.097±0.025, 肺W/D比值:4.860±0.337比3.653±0.332, 均P<0.05〕, 胶原纤维沉积明显增加, 且肺组织MDA含量明显升高(nmol/g:212.420±8.757比97.073±5.308, P<0.05), GSH含量及VDR、GPX4的蛋白表达和免疫组化评分(IRS)明显降低〔GSH(μg/g):44.229±1.690比70.840±0.781;VDR蛋白(VDR/GAPDH):0.518±0.029比0.762±0.081, GPX4蛋白(GPX4/GAPDH):0.452±0.032比0.649±0.034;IRS评分(分):VDR为4.168±0.408比10.167±0.408, GPX4为4.333±1.033比10.333±0.516;均P<0.05〕。给予paricalcitol激活VDR后, 与HVT组相比, P+HVT组小鼠肺损伤明显改善, 表现为肺损伤评分和肺W/D比值明显降低〔肺损伤评分(分):0.220±0.036比0.430±0.035, 肺W/D比值:4.015±0.074比4.860±0.337, 均P<0.05〕, 胶原纤维沉积减少, 且肺组织MDA含量明显下降(nmol/g:123.840±8.082比212.420±8.757, P<0.05), GSH含量及VDR、GPX4的蛋白表达和IRS评分明显上调〔GSH(μg/g):63.094±0.992比44.229±1.690;VDR蛋白(VDR/GAPDH):0.713±0.056比0.518±0.029, GPX4蛋白(GPX4/GAPDH):0.605±0.008比0.452±0.032;IRS评分(分):VDR为9.000±0.632比4.168±0.408, GPX4为8.833±0.408比4.333±1.033;均P<0.05〕。结论维生素D类似物paricalcitol可通过激活VDR/GPX4通路改善肺组织氧化还原失衡, 从而减轻VILI。
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