pH响应比色酶联免疫吸附法检测牛奶中猪霍乱沙门氏菌

作者：李倩影; 张抗抗; 周耀锋; 黄小林; 李响敏^*; 熊勇华

来源：食品工业科技, 2021, 42(01): 227-232.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019100100

• pH响应比色酶联免疫吸附法(pH-ELISA)
• 葡萄糖氧化酶
• 溴甲酚紫
• 猪霍乱沙门氏菌

人类常常因误食被猪霍乱沙门氏菌感染的食物而引发中毒。因此,急需构建适用于快速、灵敏检测食物中猪霍乱沙门氏菌污染的新方法。鉴于此,本文构建了一种pH响应比色酶联免疫吸附法灵敏检测牛奶中猪霍乱沙门氏菌。该方法利用葡萄糖氧化酶催化底物葡萄糖产生葡萄糖酸,导致溶液pH下降,进而引发溴甲酚紫(Bromocresol purple,BCP)溶液颜色由紫色变成亮黄色,随后通过记录BCP颜色变化(OD430/OD590)实现目标菌的定量检测。当菌浓度为2.54×103～6.17×105 CFU/mL,该方法定量检测猪霍乱沙门氏菌可用方程一表述:y1=0.1051ln(x)+0.7024(R2=0.7513);当菌浓度为6.17×105～1.67×107 CFU/mL,该方法定量检测猪霍乱沙门氏菌可用方程二表述:y2=1.3216ln(x)-15.797(R2=0.9711);当菌浓度大于1.67×107 CFU/mL时,BCP溶液呈现明显亮黄色,OD430/OD590值趋于稳定,无法实现猪霍乱沙门氏菌定量检测。将六个不同浓度的猪霍乱沙门氏菌(2.5×103～5.6×106 CFU/mL)加标至牛奶中,检测结果显示回收率介于72.16%～103.58%,相对标准偏差介于7.54%～15.30%。总之,本研究所构建的比色ELISA方法适用于牛奶中不同浓度的猪霍乱沙门氏菌快速、灵敏定量检测。

• 单位
  南昌大学; 食品科学与技术国家重点实验室