实时荧光定量PCR法检测外源性DNA在重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的残留

作者：梁凯歌; 孙丹丹^*

来源：中国医药生物技术, 2023, 18(01): 30-34.

• 实时荧光定量PCR
• 重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维
• 外源性DNA残留

目的 对实时荧光定量PCR(qPCR)法检测重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的外源性DNA残留量进行探究和分析，确定该方法用于DNA质量控制的可行性。方法 采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒（磁珠法）提取DNA，利用E.coli残留DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）进行扩增反应，绘制标准曲线，建立重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的qPCR检测方法。结果 对8批重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维进行测定，外源性DNA残留量在0.03～300 pg/μl内，重复性良好，均远低于每剂10 ng，线性良好（R2> 0.99），回收率均在50%～150%之间。结论 该方法可用于重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的定量测定。