低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定

作者：屈野; 陈晓; 杨静; 郭小芹; 李玲; 王越

来源：武警后勤学院学报(医学版), 2015, 24(12): 942-945.

DOI：10.16548/j.2095-3720.2015.12.005

• 低氧诱导因子
• 低氧反应元件
• 荧光素酶
• 报告基因

【目的】构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达。【方法】化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入p GL3-BASIC,经PCR、酶切和测序鉴定,获得p GL3-HRE荧光素酶报告载体;然后以p GL3-HRE和β-gal DNA共转染MG63细胞,通过物理和化学低氧来检测其活性,并western blotting分析转染细胞HIF-1表达水平。【结果】获得了p GL3-HRE荧光素酶报告载体,PCR、酶切和测序鉴定均与预期一致;物理低氧(1%O2)和化学低氧(不同浓度Co Cl2)均可诱导转染MG63细胞荧光素酶表达水平的升高(P<0.05),其中以Co Cl(3002μmol/L)组最为显著,western blotting结果也显示Co Cl2(300μmol/L)组HIF-1表达水平更为显著(P<0.05),与荧光素酶表达趋势一致。【结论】成功构建了HRE荧光素酶报告载体,为进一步研究HIF-1的表达调控作用及筛选抗低氧药物提供了工具。

• 单位
  武警后勤学院