人β-分泌酶(BACE1)在毕赤酵母中分泌表达及纯化

作者：王鹏; 赵颖; 朱平; 方唯硕

来源：生物工程学报, 2011, (11): 1655-1666.

DOI：10.13345/j.cjb.2011.11.015

• β-分泌酶
• 糖基化
• 毕赤酵母
• 肽质量指纹图谱 β-secretase
• glycosylation
• Pichia pastoris
• peptide mass fingerprint

为了获得活性良好的重组人β-分泌酶(β-secreatase,BACE1),用于研究其与抑制剂的作用模式,构建了携带β-分泌酶proBACE1和BACE1编码序列的重组表达质粒pPIC9K-MetBACE22和pPIC9K-MetBACE46,通过电击法转入毕赤酵母GS115中,分别得到重组子9k-B22和9k-B46。重组菌株在诱导表达培养基中诱导外源基因表达,结果显示9k-B22的上清活性明显高于9k-B46的上清活性。9k-B22表达上清浓缩后经HisTrap亲和柱纯化得到的蛋白具有良好的BACE1活性,SDS-PAGE/高碘酸-希夫试剂染色发现其为糖蛋白,并且其糖基侧链可以被Endo ...

• 单位
  天然药物活性物质与功能国家重点实验室; 药物研究所; 中国医学科学院北京协和医学院