β-1,3-1,4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌株的构建与发酵研究

作者：裴红蕾; 陈轶群; 吕俊楠; 杨雯涵; 李志民; 曹云鹤

来源：中国畜牧杂志, 2013, (03): 64-68.

• β-1
• 3-1
• 4葡聚糖酶
• 双拷贝
• 毕赤酵母
• 发酵 β-1
• 4 glucanase
• two copy
• Pichia pastoris
• fermentation

本试验旨在研究β-1,3-1,4葡聚糖酶双拷贝基因毕赤酵母工程菌株的构建及发酵。首先,通过对质粒pGAP-glu-opt进行PCR扩增获得密码子优化的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因glu-opt,用EcoR I和Not I双酶切后与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,获得重组质粒p9K-glu-opt。该重组质粒经Sac I线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,利用不含组氨酸的MDS平板和摇瓶培养,筛选重组菌株,命名为GS115/9K-glu-opt。制备GS115/9K-glu-opt感受态细胞,再用线性化的重组质粒pPIC-glu-opt二次转化,在含有抗生素Zeocin的YPDS平板上筛选g...

• 单位
  动物营养学国家重点实验室; 中国农业大学; 动物科技学院