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摘要
目的 构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。 方法 经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18- PE38融合基因,将其与真核表达载体Psec Tag2 B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,Eco R 单酶切鉴定。脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况。 结果 Eco R 单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体Psec Tag2 B- IL- 18- PE38片段长度约为6 0 0 0 bp。荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。 结论 IL- 18- PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础。
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单位四川大学; 生物治疗国家重点实验室
