褪黑素和尼莫司汀对胶质瘤细胞EMT及侵袭迁移能力影响协同作用

作者：龙艳春; 朱佳斌; 赵晓瑾; 尚发军

来源：中华肿瘤防治杂志, 2021, 28(11): 819-826.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2021.11.04

• 胶质瘤
• 褪黑素
• 尼莫司汀
• 上皮间充质转化
• ERK1/2

目的分析褪黑素与尼莫司汀协同对胶质瘤细胞上皮间充质转化(EMT)和侵袭迁移抑制作用,并探讨其作用机制。方法褪黑素(0.75mmol/L)和尼莫司汀(100μmol/L)单独使用或联合使用处理胶质瘤U118和LN-18细胞。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测褪黑素和尼莫司汀对胶质瘤细胞增殖抑制作用及半抑制浓度(IC50);采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测褪黑素联合尼莫司汀对胶质瘤U118细胞侵袭迁移影响;采用蛋白质印迹法检测胶质瘤U118细胞中E-Cadherin、N-Cadherin、vimentin、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达。结果 CCK-8实验结果表明,0.25、0.5、0.75和1mmol/L褪黑素作用于U118细胞和LN-18细胞48h后,U118细胞活力分别为(103.50±5.46)%、(98.03±6.08)%、(86.34±6.34)%和(69.21±4.07)%;LN-18细胞活力分别为(97.15±4.45)%、(92.49±5.67)%、(83.39±7.30)%和(75.38±5.69)%;与对照组相比,褪黑素可抑制U118细胞(F=50.150,P<0.001)和LN-18细胞(F=7.053,P<0.001)增殖。50、75、125和250μmol/L尼莫司汀作用于U118细胞和LN-18细胞48h后,U118细胞活力分别为(100.79±5.96)%、(88.36±3.27)%、(60.08±3.37)%和(40.95±4.37)%;LN-18细胞活力分别为(82.12±8.03)%、(66.43±4.74)%、(55.75±6.44)%和(43.41±4.65)%;与对照组相比,尼莫司汀可抑制U118细胞(F=42.179,P<0.001)和LN-18细胞(F=467.879,P<0.001)增殖。协同实验结果显示,褪黑素(0.75mmol/L)联合尼莫司汀(100μmol/L)时,U118细胞和LN-18细胞相互作用指数(CDI)分别为0.43和0.71;与对照组相比,褪黑素组、尼莫司汀组和联合治疗组U118细胞活力分别为(86.34±6.34)%、(69.79±6.67)%和(57.45±4.56)%;LN-18细胞活力分别为(83.39±7.30)%、(62.46±7.33)%和(48.53±5.27)%,与尼莫司汀组比较,联合治疗组抑制U118细胞(F=8.022,P=0.028)和LN-18细胞(F=8.805,P=0.027)增殖。划痕实验结果表明,对照组、褪黑素组、尼莫司汀组、联合治疗组划痕愈合率分别为(96±8)%、(78±5)%、(50±6)%和(35±3)%,与尼莫司汀组比较,联合治疗组抑制U118细胞迁移,F=9.228,P=0.038。Transwell实验结果表明,对照组、褪黑素组、尼莫司汀组、联合治疗组细胞迁移数目分别为(826±73)、(462±37)、(173±33)和(42±9)个,与尼莫司汀组比较,联合治疗组抑制U118细胞侵袭,F=7.906,P=0.048。蛋白质印迹结果表明,U118细胞中对照组、褪黑素组、尼莫司汀组、联合治疗组N-Cadherin表达量分别为1.00±0.05、0.71±0.08、0.31±0.02和0.23±0.01;vimentin表达量分别为1.00±0.04、0.63±0.06、0.45±0.03和0.19±0.01;E-Cadherin表达量分别为1.00±0.17、1.12±0.23、4.63±0.19和5.67±0.25;p-ERK1/2与ERK1/2比值分别为1.00±0.27、1.11±0.13、0.67±0.06和0.26±0.07;与尼莫司汀组比较,联合治疗组N-Cadherin表达(F=8.010,P=0.047)、vimentin表达(F=8.510,P=0.043)、p-ERK1/2与ERK1/2比值(F=17.801,P=0.013)降低;E-Cadherin(F=10.831,P=0.030)表达增加。结论褪黑素联合尼莫司汀可通过ERK1/2信号通路协同降低胶质瘤EMT和侵袭迁移能力。

• 单位
  三峡大学仁和医院