甜菜夜蛾SeABCB3基因的克隆、表达及与Bt Cry1Ab35的结合特性分析

作者：郭晓昌; 赵丹; 王倩; 王冠迪; 温晶鑫; 吴涵; 郭巍^*

来源：中国生物防治学报, 2023, 1-11.

DOI：10.16409/j.cnki.2095-039x.2023.01.052

• 甜菜夜蛾
• ABC转运蛋白
• 克隆与表达
• 表达分析

为了深入解析Cry1Ab蛋白对主要农业害虫甜菜夜蛾的作用机制，本研究开展了甜菜夜蛾ABC转运蛋白（ATP-binding cassette transporter）与Bt Cry1Ab35蛋白的结合特性研究。首先，本研究克隆获得了甜菜夜蛾ABC转运蛋白SeABCB3全长基因序列（GenBank登录号为OP948097），开放阅读框为3915 bp，编码1304个氨基酸，预测蛋白分子量为142.66 kDa。进一步克隆了编码膜外区域SeABCB3-OM，并构建了原核表达载体pET30a-SeABCB3-OM，成功表达38 kDa的重组蛋白；并且Ligand blot及ELISA分析结果显示重组蛋白SeABCB3-OM能与Bt Cry1Ab35活化蛋白特异性结合，推测其为Bt Cry1Ab35蛋白的受体蛋白。实时荧光定量PCR（quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）结果表明，SeABCB3在甜菜夜蛾的各龄期和不同组织中均有表达，其中在卵期和马氏管的表达量最高；本研究克隆获得甜菜夜蛾SeABCB3基因，分析了各龄期及组织结构的表达情况，明确了SeABCB3蛋白与Bt Cry1Ab35蛋白的结合特性，为进一步深入研究Bt Cry蛋白对甜菜夜蛾的杀虫作用机制提供了基础。

• 单位
  中国农业科学院研究生院; 河北农业大学