摘要
为了深入解析Cry1Ab蛋白对主要农业害虫甜菜夜蛾的作用机制,本研究开展了甜菜夜蛾ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)与Bt Cry1Ab35蛋白的结合特性研究。首先,本研究克隆获得了甜菜夜蛾ABC转运蛋白SeABCB3全长基因序列(GenBank登录号为OP948097),开放阅读框为3915 bp,编码1304个氨基酸,预测蛋白分子量为142.66 kDa。进一步克隆了编码膜外区域SeABCB3-OM,并构建了原核表达载体pET30a-SeABCB3-OM,成功表达38 kDa的重组蛋白;并且Ligand blot及ELISA分析结果显示重组蛋白SeABCB3-OM能与Bt Cry1Ab35活化蛋白特异性结合,推测其为Bt Cry1Ab35蛋白的受体蛋白。实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)结果表明,SeABCB3在甜菜夜蛾的各龄期和不同组织中均有表达,其中在卵期和马氏管的表达量最高;本研究克隆获得甜菜夜蛾SeABCB3基因,分析了各龄期及组织结构的表达情况,明确了SeABCB3蛋白与Bt Cry1Ab35蛋白的结合特性,为进一步深入研究Bt Cry蛋白对甜菜夜蛾的杀虫作用机制提供了基础。
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单位中国农业科学院研究生院; 河北农业大学