携带前强啡肽基因的Ad5F35重组腺病毒制备及鉴定

作者：肖建斌; 项红兵; 司俊丽; 招伟贤; 戴双华; 高巨

来源：中华实验外科杂志, 2009, (08): 1072-1074.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2009.08.045

• 强啡肽类
• 重组腺病毒
• 基因治疗

目的用Ad5F35载体制备携带前强啡肽基因的重组腺病毒Ad5F35-PDP并对其进行鉴定。方法利用NheI和AgeI分别对合成的目的基因prodynorphin聚合酶链反应(PCR)产物和pDC316-LacZ-a载体质粒进行双酶切。将PDP目的基因片段和线性化的pDC316连接,克隆构建pDC316-PDP。pDC316-PDP与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞制备Ad5F35-PDP重组腺病毒,收获并纯化病毒,检测重组病毒滴度,运用PCR进行鉴定。结果编码PDP的基因序列经测序鉴定证实与Gene Bank中的一致,pDC316-PDP构建成功。pDC316-PDP与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明两者在293细胞中同源重组并包装成功。经PCR证实Ad5F35-PDP重组腺病毒构建完成。病毒滴度为1×10~(12)v.p./ml。结论本实验成功制备了含PDP全序列的高滴度、高纯度的Ad5F35-PDP重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-PDP重组腺病毒对吗啡成瘾患者进行基因治疗奠定了基础。

• 单位
  广东省中医院; 广州中医药大学第二附属医院