人BRMS1干扰质粒的构建及其有效性的鉴定

作者：杨银龙; 王福宾; 张强鸽; 翟羽; 邵志敏

来源：中华肿瘤防治杂志, 2010, 17(06): 401-405.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2010.06.003

• 乳腺癌转移抑制基因1
• RNA干扰
• 小干扰RNAs

目的:构建针对人BRMS1基因的RNA干扰表达载体并检测其有效性,为后续研究提供基础。方法:设计合成针对人BRMS1的特异性si RNA前体寡核苷酸,依次通过退火,连接,构建含前体si RNA的重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-BRMS1-si-RNA。经测序鉴定后,通过脂质体介导将其与pDsRed2-N1-BRMS1质粒(包含BRMS1红色荧光融合蛋白的载体)共转染人胚肾293细胞。分别用倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞中红色荧光蛋白的强度,检测干扰效果。结果:确定了两对针对人BRMS1的si RNA片段。经测序鉴定,两种含前体si RNA的质粒均构建成功。共转染后,倒置荧光显微镜下观察可见,两种si R-NA均能明显降低细胞中BRMS1的表达;用流式细胞仪检测证实,si RNA1及si RNA2分别使BRMS1表达下降67.33%和76.67%,与阴性对照组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:成功构建了针对人BRMS1基因的si RNA表达质粒,为进一步利用RNA干扰技术研究BRMS1功能与作用机制奠定了基础。

• 单位
  复旦大学; 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所; 温州医学院附属第一医院; 复旦大学附属肿瘤医院