改良Alu-PCR技术检测HepG2.2.15细胞HBV整合的研究

作者：阮鹏; 何春萍; 黄超; 周瑞^*

来源：肝脏, 2022, 27(07): 785-788.

DOI：10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2022.07.012

• 乙型肝炎病毒
• HBV整合
• Alu-PCR技术
• HepG2.2.15细胞

目的 采用改良Alu-PCR技术检测HepG2.2.15细胞中HBV整合位点。方法 对传统检测HBV整合的Alu-PCR技术进行改良简化，检测HepG2.2.15细胞中的HBV整合位点，HepG2细胞进行对照。RT-PCR定量检测HepG2.2.15细胞中检测到的HBV整合位点和cccDNA水平。结果 在HepG2.2.15细胞中检测到一插入Alu重复序列的HBV整合位点，病毒结合端为1 228 nt，嵌合片段有3bp的同源序列(CTG)。加入双氧水(H2O2)的HepG2.2.15细胞中该整合位点水平为(-1.13±0.07)lg拷贝/细胞高于未加入H2O2的(-2.10±0.82)lg拷贝/细胞，差异有统计学意义(P<0.01)。加入H2O2的HepG2.2.15细胞中cccDNA水平为(-1.94±1.45)lg拷贝/细胞，未加入H2O2的为(-1.79±1.40)lg拷贝/细胞，差异无统计学意义(P=0.915)。该整合位点和cccDNA水平无显著相关性(P=0.463)。结论 采用简易、经济的改良Alu-PCR技术检测HBV整合位点有效简化了实验步骤和节省实验费用，大大降低了HBV整合研究的门槛。对整合位点的定量检测显示肝细胞持续损伤可导致HBV整合细胞的优势克隆扩增。

• 单位
  武汉大学人民医院