hsa-miRNA-216a-5p在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中负性调控NPR3表达

作者：徐昊; 许闫严; 马中希; 刘贤莉; 尹秀萍

来源：武汉大学学报(医学版), 2022, 43(02): 215-219.

DOI：10.14188/j.1671-8852.2021.0208

• 微小RNA-216a-5p
• 骨髓间充质干细胞
• 利尿钠肽受体3
• 双荧光素酶报告基因

目的:探讨hsa-miRNA-216a-5p(miR-216a)对人源性骨髓间充质干细胞(hMSC)成骨分化的影响并验证其对利尿钠肽受体3(NPR3)基因的靶向作用。方法:原代培养hMSC至第6代后诱导成骨分化;在分化第0、7和14天收集细胞,利用Real-time PCR验证miR-216a的正常表达;慢病毒介导外源性miR-216a在hMSC中高表达,经成骨诱导剂作用后,检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(RUNX2)及成骨相关转录因子抗体(Osterix)表达;茜素红染色细胞鉴定基质矿化;经TargetScan预测NPR3基因为miR-216a的靶基因后,检测miR-216a对NPR3表达的影响;构建包含NPR3-3’UTR的荧光素酶表达质粒及其突变体,分别与miR-216a或阴性对照质粒共转染至HEK293细胞,通过测定荧光素酶表达推测miR-216与NPR3-3’UTR的结合关系。结果:在hMSC向成骨细胞分化第7天和第14天,miR-216a表达下降;高表达外源性miR-216a导致hMSC体外成骨能力下降,特异性成骨基因ALP、RUNX2和Osterix随之降低;成骨分化过程中,NPR3的表达趋势与miR-216a相反;miR-216a通过NPR3的3’UTR区降低荧光素酶表达活性;突变NPR3-3’UTR上miR-216a结合位点的抑制作用消失。结论:在骨髓间充质干细胞的体外成骨分化过程中,miR-216a负性调控NPR3的表达。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属普爱医院