利用CRISPR/Cpf1系统构建稳定敲除LncRNA458314的肾癌细胞株及其功能探讨

作者：周洋; 陈兵海^*; 王诚悦

来源：江苏大学学报(医学版), 2020, 30(01): 29-33.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y190220

• 肾癌
• 长链非编码RNA
• CRISPR/Cpf1
• LncRNA458314
• 基因编辑系统

目的:通过新基因编辑系统CRISPR/Cpf1稳定敲除肾癌细胞769P中的LncRNA458314,并初步研究LncRNA458314在肾癌中的作用。方法:使用CRISPR/Cpf1系统敲除肾癌细胞769P的LncRNA458314,并通过荧光定量PCR检测敲除效率。通过CCK8实验检测LncRNA458314敲除后769P细胞的增殖能力;蛋白质印迹法检测LncRNA458314敲除后769P细胞pAKT、pERK和LC3A/B蛋白的表达。结果:荧光定量PCR结果表明CRISPR/Cpf1系统成功敲除了目标LncRNA458314,并且通过多次荧光定量PCR检测对比后,挑选了两个稳定LncRNA458314低表达的769P单克隆细胞(6#和13#)用于后续实验。CCK8实验表明,LncRNA458314下调后,肾癌769P细胞的增殖能力明显下降;蛋白质印迹结果表明,LncRNA458314敲除后的769P细胞pAKT、pERK表达水平明显下降,LC3A/B表达水平明显上升。结论:LncRNA458314可能通过调控pAKT、pERK和LC3A/B表达发挥其生物学功能。

• 单位
  江苏大学附属医院