代谢型谷氨酸受体5的纯化及纳米抗体的筛选

作者：王辉; 马梦洁; 许剑锋^*

来源：工业微生物, 2023, 53(05): 156-162.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6678.2023.05.042

• 代谢型谷氨酸受体5
• M13噬菌体展示技术
• 纳米抗体

文章首先采用细胞表达抑制状态的代谢型谷氨酸受体5(Metabotropic glutamate receptor 5,m GluR5)蛋白免疫野生双峰驼，构建纳米抗体文库，运用M13噬菌体展示技术，筛选出与m Glu R5具有特异性结合的纳米抗体；其次用细胞对m GluR5蛋白进行表达纯化，然后对野生单峰驼进行7次免疫，对抽取骆驼的外淋巴细胞总RNA进行提取，经过反转录的方式转为c DNA，将用巢式PCR对VHH片段进行扩增并与p MECS噬菌粒载体进行连接，并电转化至TG1大肠杆菌中构建纳米抗体噬菌体展示文库；其三通过M13噬菌体展示技术对文库进行淘选，淘选出多个互补决定区3序列不同的纳米抗体；最后纯化出纯度较高的m GluR5蛋白，构建出库容量为5.47×108CFU/mL的噬菌体文库菌，经过两轮液相淘选，获得了12个互补决定区3序列不同的纳米抗体。研究成功筛选出12个与m GluR5特异性结合较高的纳米抗体，为m Glu R5的靶向药物研发和G蛋白偶联受体的信号通路研究奠定了基础。

• 单位
  上海海洋大学; 中国科学院上海药物研究所