PFKFB3抑制剂减轻高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

作者：牛津; 张敏; 王巧娟; 刘振华; 顾晓明; 冯娜; 张淑苗; 贾敏; 樊荣; 李娟; 裴建明

来源：心脏杂志, 2021, 33(02): 117-122.

• PFKFB3
• 血管钙化
• 血管平滑肌细胞
• 糖酵解

目的探究果糖-2, 6-二磷酸酶3(6-bisphosphatase 3, PFKFB3)抑制剂3-PO对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)钙化的作用及其潜在机制。方法将原代培养的VSMC随机分为:对照(Con)组、高磷诱导(β-GP)组、高磷诱导+3-PO(β-GP+3-PO)组、对照+乳酸钠(Con+Lactate)组、对照+乳酸钠+3-PO(Con+Lactate+3-PO)组。实验前后用微板法检测细胞内钙和碱性磷酸酶(ALP)含量;茜素红染色检测VSMC钙化程度;CCK 8试剂盒检测细胞活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测表型转化相关蛋白(RUNX2,BMP-2, SM22a)及糖酵解相关蛋白(PFKFB3, HKⅡ, GLUT1与GLUT4)表达水平,比色法检测乳酸含量及乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果与Con组比较,β-GP组VSMC钙化程度及成骨蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞活力显著降低(P<0.01),而给予3-PO可显著逆转β-GP组的VSMC表型转化蛋白的表达变化(P<0.05),并使细胞活力增加(P<0.01)。进一步的研究证实,β-GP组中PFKFB3表达水平,乳酸含量及LDH活力显著增加(P<0.01),而在β-GP+3-PO组中显著下调(P<0.01),其余糖酵解蛋白表达水平未明显改变。另外,乳酸钠也可引起VSMC钙化程度及表型转化蛋白表达的增加(P<0.01),给予3-PO可逆转乳酸钠引起的VSMC钙化和表型转化(P<0.05)。结论 PFKFB3抑制剂3-PO可能通过降低PFKFB3表达抑制糖酵解水平,从而抑制了高磷诱导的VSMC的钙化,研究结果为临床治疗血管钙化提供了潜在的药物靶点。

• 单位
  西北大学; 基础医学院; 中国人民解放军空军军医大学