应用RNA干扰下调多药耐药蛋白4表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响

作者：于志奇; 张畅; 柴瑞; 劳昕元; 王颢; 高显华; 韩一芳; 张晓青; 曹广文; 傅传刚

来源：中华胃肠外科杂志, 2012, 15(1): 67-71.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0274.2012.01.022

• 结直肠肿瘤
• 多药耐药蛋白4
• RNA干扰
• 照射敏感性

目的 探讨多药耐药蛋白4(MRP4)表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响.方法 应用慢病毒感染RNA干扰技术(RNAi)稳定下调人结直肠癌细胞株HCT116中MRP4的表达.将HCT116细胞分为未感染任何病毒的细胞株(CON)、加阴性对照病毒感染的细胞株(NC)和加RNAi靶点病毒感染的细胞株(KD)3组,应用实时定量RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平检测MRP4表达变化,以验证RNAi的有效性.4 Gy剂量照射后24 h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖,比较RNAi后HCT116细胞株照射敏感性的差异.结果 成功构建并转染慢病毒质粒,获得稳定沉默MRP4表达的HCT116-KD细胞株.HCT116-KD细胞株MRP4 mRNA和蛋白表达水平较对照均明显下调(P＜0.05).照射后24 h,KD细胞株凋亡率为(71.7±0.8)％,明显高于CON组[(56.1±0.9)％]和NC组[(59.8±0.8)％](P＜0.05).照射后48 h和72 h,KD细胞增殖能力较对照组明显下降(P＜0.05).结论 MRP4在结直肠癌细胞中的表达水平与照射耐受显著相关,应用慢病毒感染RNA干扰下调MRP4表达可以增强结直肠癌细胞照射敏感性.MRP4有可能成为预测放疗敏感性的分子标志物.

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 长海医院