摘要
目的 探讨早期生长反应因子1(Egr1)调控抗衰老基因Klotho促进肝细胞癌(HCC)增殖的分子机制。方法 体外培养肝癌细胞株HepG2、Hep3B,将si-Egr1阴性对照(si-NC)、si-Egr1、Egr1质粒、Klotho质粒、Egr1质粒+Klotho质粒、质粒阴性对照转染入HepG2和Hep3B细胞,标记为si-NC组、si-Egr1组、Egr1质粒组、Klotho质粒组、Egr1质粒+Klotho质粒组、质粒阴性对照组,采用荧光定量聚合酶链反应检测Egr1、Klotho基因mRNA表达量;采用蛋白质印记法检测Egr1、Klotho蛋白表达水平;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力。将人胚肾上皮细胞293T按以下分组进行转染:Egr1质粒+Klotho野生载体组、Egr1质粒阴性对照+Klotho野生载体组、Egr1质粒+Klotho突变载体组、Egr1质粒阴性对照+Klotho突变载体组,采用双荧光素酶报告基因检测293T中Egr1与Klotho启动子区的调控关系。结果 与si-NC组比较,si-Egr1组Klotho表达上调,癌细胞增殖能力降低,差异均有统计学意义(P均<0.01)。与质粒阴性对照组比较,Egr1质粒组Klotho表达降低,癌细胞增殖能力增强,差异均有统计学学意义(P均<0.01);Klotho质粒组Egr1表达无明显变化,癌细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P<0.01);与Egr1质粒组比较,Egr1质粒+Klotho质粒组细胞增殖能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。Egr1质粒+Klotho野生载体组的荧光素酶活性低于Egr1质粒阴性对照+Klotho野生载体组[(0.41±0.05)vs.(1.00±0.09)],差异有统计学意义(t=16.173,P<0.01);Egr1质粒+Klotho突变载体组与Egr1质粒阴性对照+Klotho突变载体组荧光素酶活性比较[(0.98±0.03)vs.(1.02±0.11)],差异无统计学意义(t=0.591,P=0.673)。结论 抑制Egr1表达可以通过转录上调Klotho基因表达降低肝癌细胞的增殖能力。
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