结核分枝杆菌Rv3586结构域基因真核表达载体的构建及鉴定

作者：吴骏杰; 王辛; 宋世杰; 姚庆港; 单炳乙; 王莹; 路延之; 柏银兰

来源：现代生物医学进展, 2017, 17(18): 3429-3433.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2017.18.006

• 结核分枝杆菌
• Rv3586
• 结构域
• 真核表达

目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)环二腺苷酸(cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)合成酶Rv3586结构域基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法:以Mtb基因组为模板PCR扩增Rv3586三个结构域基因,分别克隆入pEGFP-N3真核表达质粒,用菌落PCR、质粒酶切和测序方法对插入序列进行鉴定。通过脂质体将重组质粒转染COS-7细胞,间接免疫荧光法检测目的基因在COS-7细胞内的表达。结果:PCR成功扩增出Rv3586三个结构域基因,菌落PCR、质粒酶切和质粒测序鉴定结果表明成功插入目的片段,包含Rv3586的三个结构域基因的真核表达载体构建成功。间接免疫荧光法结果显示,Rv3586三个结构域蛋白在COS-7细胞中表达成功。结论:成功构建Rv3586三个结构域基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达成功,为后续Mtb Rv3586结构域的功能和应用研究奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学; 西安市第九医院; 第四军医大学第一附属医院