人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达

作者：杨海; 王芳宇; 李青旺; 胡建宏; 董潇潇; 单永红

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2013, (10): 32-36.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2013.10.001

• 反向PCR
• 人抗凝血酶
• Cys248
• 定点突变
• 真核表达 inverse PCR
• human antithrombin
• Cys248
• site directed mutation
• eukaryotic expression

【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mATGFP;用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达,收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】突变基因经测序证实与预期结果一致,且在GME细胞内得到高效表达,细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3)mg/L。【结论】反向PCR法是...

• 单位
  南岳生物制药有限公司; 动物科技学院; 西北农林科技大学; 衡阳师范学院