HAD患者来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β细胞因子的影响

作者：李丹迪; 秦泽明; 贺淑婷; 温红玲; 黄涛; 张克胜^*; 赵丽^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2021, 35(03): 241-245.

DOI：10.3760/cma.j.cn112866-20210413-00063

• HIV-1
• HIV-1相关痴呆
• HIV-1 Nef蛋白
• TNF-α
• IL-1β

目的探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia, HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system, CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1nef基因, 与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体, 转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况, 采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h～62 h, 每间隔5 h收集U87细胞的培养上清, ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量, 分析两种细胞因子的动态表达情况。结果成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的nef基因的重组的pcDNA3.1-nef真核表达载体, 转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示, Nef蛋白在转染后42 h开始表达, Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示, 转染后22 h、27 h、32 h、37 h, 各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多, 但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α:F=0.445,P=0.837; F=0.579,P=0.742; F=0.617,P=0.714; F=2.728,P=0.057。IL-1β:F=2.656,P=0.062; F=0.485,P=0.809; F=0.165,P=0.982; F=2.463,P=0.093); 42 h后, 各组细胞因子含量逐渐降低, 57 h～62 h, TNF-α及IL-1β含量基本维持稳定;转染后42 h、47 h、52 h、57 h、62 h, 实验组两种细胞因子的含量明显高于对照组, 差异有统计学意义(TNF-α:F=241.310,P<0.001; F=242.638,P<0.001; F=250.114,P<0.001; F=143.877,P<0.001; F=146.172,P<0.001。IL-1β:F=251.578,P<0.001; F=188.816,P<0.001; F=276.240,P<0.001; F=238.136,P<0.001; F=163.361,P<0.001), 各对照组间或实验组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HIV-1 Nef蛋白能诱导并增强U87细胞分泌TNF-α和IL-1β的能力, 而HAD患者体内不同来源的HIV-1 Nef蛋白发生氨基酸变异对U87细胞分泌TNF-α和IL-1β无影响。

• 单位
  山东大学; 公共卫生学院; 山东省疾病预防控制中心