基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶条件的优化

作者：黄炯威; 莫世艺; 刘宁; 梁剑锋; 刘桂祯

来源：中国药业, 2014, 23(07): 22-24.

• 核苷磷酸化酶
• 基因工程菌
• 发酵
• 优化

目的优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50 L发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始pH为7.07.2,于30℃培养4 h,加入终浓度为0.4 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导8 h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50 L发酵罐的最佳条件为起始pH为7.07.2,于32℃培养4 h,加入终浓度为0.4 mmol/L的IPTG诱导9 h后收获菌体,每升发酵液可得2 g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。

• 单位
  开平牵牛生化制药有限公司; 厦门大学