依维莫司对顺铂产生抗人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞效应的增效作用研究

作者：丁敏; 徐松; 李莉; 毕素云; 周之海; 李岷; 杨海平^*; 陈旭^*; 顾恒

来源：中华皮肤科杂志, 2017, 50(06): 421-425.

• 顺铂
• 细胞凋亡
• 自噬
• COLO-16细胞
• 依维莫司

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200 nmol/L的依维莫司和25 μmol/L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24 h, 用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自噬流水平。Western印迹分析自噬标记性分子LC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转化、Caspase 3和PARP剪切;LDH释放实验分析细胞死亡;Annexin V-EGFP染色分析细胞凋亡。结果 50、100、200 nmol/L的依维莫司处理COLO-16细胞后, 12 h LC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3.52 ± 0.21、4.03 ± 0.39、5.05 ± 0.22, 两两之间比较, 差异无统计学意义(P > 0.05), 与未用药物处理的对照组(2.07 ± 0.05)比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。24 h LC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3.38 ± 0.26、3.29 ± 0.06、6.57 ± 0.16, 两两之间比较, 差异无统计学意义(P > 0.05), 与对照组(2.61% ± 0.16%)比较, 差异有统计学意义(P < 0.05)。50、100、200 nmol/L的依维莫司联合E64d、pepstatin处理COLO-16细胞12 h后, LC3-Ⅱ与β肌动蛋白的比值分别为1.26 ± 0.40、1.16 ± 0.34、1.21 ± 0.39, 与E64d、pepstatin单独处理细胞组(1.19 ± 0.27)比较, 差异无统计学意义(P > 0.05)。100 nmol/L依维莫司联合E64d、pepstatin自噬体囊泡表达阳性率2.06 ± 0.61, 与E64d、pepstatin单独处理细胞组(1.68 ± 0.62)比较, 差异无统计学意义(P > 0.05)。依维莫司与顺铂联合处理24 h细胞死亡率42.58% ± 0.93%, 高于顺铂单独处理的细胞(死亡率18.20% ± 1.46%), 差异有统计学意义。依维莫司联合顺铂处理与顺铂单独处理细胞相比, Caspase 3和PARP剪切、Annexin V标记细胞数以及LC3-Ⅱ形成均无统计学差异(P > 0.05)。结论依维莫司增强顺铂诱导COLO-1细胞死亡, 这种效应不依赖于凋亡和自噬调控。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院; 天津医科大学总医院; 解放军第454医院