基于NLRP3信号通路探讨清开灵对肝纤维化大鼠的影响及作用机制

作者：王珊珊; 白俊杰; 于雪; 范盎然; 杜**^*; 李卫红

来源：湖南中医药大学学报, 2023, 43(09): 1561-1569.

• 清开灵口服液
• 炎症
• 肝纤维化
• 肝星状细胞
• NLRP3炎症小体
• 四氯化碳

目的 明确清开灵口服液对CCl4大鼠的抗肝纤维化作用，并基于NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor protein domain 3, NLRP3)炎症小体通路揭示其抗肝纤维化的机制。方法 44只SD大鼠随机分为空白组、模型组、清开灵口服液组（QKL组），应用CCl4灌胃的方法建立中毒性肝纤维化大鼠模型，设置4周与8周两个时间点。实验结束后，检测各组大鼠肝、脾指数；HE染色和Masson染色观察肝组织结构变化与胶原纤维增生情况；检测血清天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）、总胆红素（total bilirubin, T-BIL）、羟脯氨酸（hydroxyproline, HYP）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidation, GSH-Px）含量；ELISA法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)水平；免疫组化检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）的表达；采用Western blot、RT-PCR法检测肝组织NLRP3、衔接蛋白凋亡相关斑点样蛋白（adaptor protein apoptosis-related dot-like protein, ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、α-SMA的蛋白和基因的表达水平。结果 与空白组相比，4周与8周模型组肝脾指数及AST、ALT、T-BIL、HYP含量均明显升高（P<0.01）、GSH-Px活力显著下降（P<0.01）,IL-1β和TNF-α含量明显升高（P<0.01）,α-SMA、NLRP3、ASC、Caspase-1的蛋白及基因表达水平均明显增加（P<0.05）。HE和Masson染色显示模型组肝组织形态结构紊乱，炎症细胞大量浸润，肝脏纤维组织增生更加明显。与模型组相比，同期清开灵组均可明显降低肝脾指数及血清AST、ALT、T-BIL含量和HYP含量（P<0.05），提高GSH-Px活力（P<0.05,P<0.01），抑制TNF-α、IL-1β合成（P<0.01,P<0.05），减轻肝组织结构紊乱和炎细胞浸润，抑制胶原纤维增生，抑制α-SMA蛋白表达（P<0.05）,NLRP3、ASC和Caspase-1在蛋白和基因水平表达呈不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。结论 清开灵口服液可显著抑制CCl4导致的大鼠肝纤维化，提高肝脏抗氧化能力，改善肝功能，缓解炎症，其机制可能与抑制星状细胞活化、抑制NLRP3炎症小体通路活化相关。

• 单位
  西藏藏医药大学; 北京中医药大学; 北京京煤集团总医院