聚乙烯亚胺载体介导的基因转移

作者：李经忠; 王青青; 余海; 沈芬平; 李达; 郑轶

来源：浙江大学学报(医学版), 2004, 33(03): 48-53.

DOI：10.3785/j.issn.1008-9292.2004.03.012

• 聚乙烯亚胺
• 转染
• 合成载体

目的 :探讨以聚乙烯亚胺为骨架的非病毒载体在基因转染中的影响因素。方法 :利用聚乙烯亚胺分别结合含β半乳糖甙酶报告基因的 p SVβ表达质粒 ,含绿色荧光蛋白报告基因的 p EGFP质粒转染 Cos- 7细胞 ,通过组织化学法测定细胞抽提产物中βgal的表达量和流式细胞仪法测定绿色荧光蛋白阳性细胞的表达比例 ,来测定影响转基因效率的各种参数。结果 :在培养液中 ,6 mg/ L聚乙烯亚胺作用 NIH 3T3细胞 2 4 h,细胞生存率为 6 4.2 % ,7mg/ L时细胞生存率为 5 4.4 %。聚乙烯亚胺在 N/ P比 3.0以上方可完全结合 DNA。溶酶体抑制剂氯喹可增加聚乙烯亚胺的转染效率 ;培养液中的白蛋白、血清可降低转染效率。作为配制聚乙烯亚胺 / DNA复合物的溶媒 ,HEPES缓冲液和生理盐水优于 2 78mmol/ L葡萄糖。在配制聚乙烯亚胺 / DNA复合物的溶媒中加入 Mg2 +可降低转染效率。结论 :通过体外细胞试验证明 ,聚乙烯亚胺是一种有效的真核细胞转染剂和人工合成基因载体的骨架

• 单位
  浙江大学