激活大麻素2型受体在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制

作者：袁清红; 刘安鹏; 刘强胜; 郑菲; 张宗泽; 王焱林; 詹佳^*

来源：中华急诊医学杂志, 2019, 28(08): 978-982.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2019.08.012

• 大麻素2型受体
• LPS
• 炎症因子
• 分泌
• 免疫调节
• RAW264.7
• 巨噬细胞
• 自噬
• NLRP3

目的 探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法 将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表法将其分为4组(n=6)：对照组(C组)、LPS组(LPS组)、LPS+CB2R激动剂HU308组(LPS+HU308组)、LPS+CB2R激动剂HU308+3-甲基腺苷组(LPS+HU308+3-MA组)。LPS组、LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为1 μg/mL的LPS,孵育15 min时,LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 mmol/L的3-MA,继续孵育15 min,LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 μmol/L的HU308孵育24 h。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18的浓度；采用RT-PCR法检测ICAM-1和NLRP3 mRNA的表达水平,采用western blot法检测LC3和Beclin1的表达水平,并计算LC3-II/LC3-I比值。结果 与C组比较,LPS组TNF-α[(228.86±10.20) pg/mLvs (140.05±5.54) pg/mL、IL-1β[(363.62±8.14) pg/mLvs (244.82±9.11) pg/mL]和IL-18[(293.28±13.57) pg/mLvs. (202.84±9.54) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(5.88±0.32)vs. (1.00±0.03)]和NLRP3[(8.07±0.93)vs. (1.01±0.05)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-II/LC3-I比值[(0.50±0.03)vs. (0.40±0.06)]和Beclin1[(0.51±0.04)vs. (0.16±0.03)]表达上调(均P<0.05)；与LPS组比较,LPS+HU308组TNF-α[(165.44±7.07) pg/mL]、IL-1β[(272.09±3.35) pg/mL]和IL-18[(220.41±6.01) pg/mL]的浓度降低(均P<0.05),ICAM-1[(3.21±0.35)]和NLRP3[(1.54±0.30)] mRNA表达降低(均P<0.05),LC3-II/LC3-I比值[(0.71±0.03)]和Beclin1[(0.71±0.02)]表达上调(均P<0.05)；与LPS+HU308组比较,LPS+HU308+3-MA组TNF-α[(197.06±5.59) pg/mL]、IL-1β[(318.98±11.54) pg/mL]和IL-18[(243.33±8.71) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(4.04±0.21)]和NLRP3 [(5.87±0.77)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-II/LC3-I比值[(0.44±0.08)]和Beclin1[(0.32±0.03)]表达下调(均P<0.05)。结论 激活大麻素2型受体可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,其作用机制可能与增强自噬有关。

• 单位
  武汉大学中南医院