半胱氨酸蛋白酶抑制剂C重组蛋白的制备

作者：张超; ***; 张传宝^*

来源：临床检验杂志, 2022, 40(08): 567-570.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2022.08.02

• 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C
• 重组蛋白
• 标准物质
• 质控品

目的 构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)原核表达载体，用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的CysC纯化蛋白，为制备应用于临床实验室检测的CysC标准物质和质控品奠定基础。方法 用Codon Adaptation Tool将人的CysC编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列，再将合成的DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体。将重组CysC表达质粒转化至E.coli BL21感受态中，优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列，并用融合标签对重组蛋白进行纯化。结果 成功构建重组CysC原核表达质粒，明确CysC表达序列，确定异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件，纯化的CysC蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。结论 成功构建重组CysC的高效原核表达系统，重组CysC蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望为CysC标准物质和质控品的制备提供物质基础。

• 单位
  中国医学科学院; 北京医院