SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用

作者：钱林; 李婷; 鲜思美^*; 曹熠; 张友; 徐松平; 陈元翠; 张益; 包细明; 饶体宇; 吴伯梅

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (09): 95-98.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.04.0213

• 羊口疮病毒
• 基因融合
• SOE-PCR
• F1L基因
• B2L基因
• 真核表达质粒

为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶消化后插入pVAX1真核表达载体中,构建B2L-F1L融合基因表达质粒,再转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,对真核表达质粒进行PCR鉴定、双酶切鉴定及序列测定。结果表明:利用SOE-PCR技术成功扩增出B2L-F1L融合基因;对真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L进行PCR鉴定和双酶切鉴定后,均可得到与预期大小一致的DNA片段;测序发现,真核表达质粒目的基因序列与预期设计一致。说明真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L构建成功。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院