基于pJFH-1的HCV全基因组扩增方法的建立

作者：郭艳; 兰林; 何长龙; 洪国祜; 程玲; 毛青

来源：第三军医大学学报, 2011, (11): 1144-1147.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2011.11.008

• 长链PCR
• pJFH-1
• HCV全基因组 long-PCR
• pJFH-1
• full-length HCV genome

目的基于pJFH-1建立能稳定扩增HCV全基因组的长链PCR方法。方法以pJFH-1为测试模板,通过优化PCR扩增中各个重要环节,包括引物的选择、甘油和/或DMSO最适浓度的筛选、循环条件的摸索等,建立能稳定扩增HCV全基因组的长链PCR方案。结果高Tm值(>65℃)的引物更有利于HCV全基因组的扩增;5%、10%甘油或5%DMSO可显著提高PCR扩增的特异性和扩增效率,且甘油的促进作用优于DMSO;双温法较三温法能获得更高产量的PCR产物。结论通过优化长链PCR反应体系及条件,成功实现HCV基因全长的扩增。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学