五种重组人源IL-18突变子表达质粒的构建及其在BxPC-3细胞中的表达

作者：孙金权; 许健; 沈雯; 吴晓莉; 牟一平; 张婷; 沃兴德

来源：科技通报, 2012, 28(3): 68-74,83.

DOI：10.3969/j.issn.1001-7119.2012.03.012

• pEGFP-C1
• hIL-18
• BxPC-3细胞
• 突变子

目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功；(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体；(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.

• 单位
  浙江中医药大学; 浙江大学医学院附属邵逸夫医院; 生命科学学院