人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达

作者：张萌; 张恺宁; 陈子怡; 王玲; 伍丽萍; 王悦; 刘冰^*; 施秉银^*

来源：西安交通大学学报（医学版）, 2023, 44(03): 409-414.

• 人促甲状腺激素受体A亚单位
• 昆虫细胞体系
• 分泌型表达
• sf9细胞
• Graves病

目的 拟构建昆虫细胞分泌表达体系，在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor, TSHR) A亚单位蛋白。方法 将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)基因连接到质粒，并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒，将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒，扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果 在蛋白表达体系的构建过程中，PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象，空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×107pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论 本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系，该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础，也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院