ZBP-89通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用

作者：李闯^*; 张正攀; 叶劲松; 刘昕; 高旭光

来源：解剖科学进展, 2021, 27(05): 596-605.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2021.05.022

• ZBP-89
• HIF-1α/Notch1通路
• 肝癌干细胞
• 干性

目的探究ZBP-89(Zinc-binding protein-89)通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用。方法构建ZBP-89过表达慢病毒载体(Len-ZBP-89)并进行慢病毒包装,微球体培养法富集肝癌干细胞,流式细胞术检测细胞中EpCAM、CD133的表达,CoCl 2(HIF-1α激活剂)处理肝癌干细胞,RT-PCR检测细胞中ZBP-89、 HIF-1α和Notch1mRNA表达,Westernblot检测细胞中ZBP-89、 HIF-1α、 Notch1、 CD44、CD133和EpCAM蛋白表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,光学显微镜观察特征性肿瘤球体的形成。结果 Len-ZBP-89慢病毒包装成功,病毒滴度为1.32×109 TU/mL;肝癌细胞PLC/PRF/5中ZBP-89 mRNA和蛋白表达水平下调,HIF-1α和Notch1 mRNA和蛋白表达水平上调;PLC/PRF/5细胞成功富集肝癌干细胞PLC/PRF/5.C,PLC/PRF/5.C中EpCAM、CD133的表达水平均上调;Len-ZBP-89可下调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,下调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量;CoCl 2(HIF-1α激活剂)可上调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,上调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量(P<0.05);CoCl 2处理可逆转Len-ZBP-89对PLC/PRF/5.C干性的抑制作用。结论过表达ZBP-89通过抑制HIF-1α/Notch1通路抑制肝癌干细胞干性。

• 单位
  深圳市龙华区人民医院