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摘要
苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae是我国重要的进境植物检疫对象，能够对十几种作物造成严重危害。为了快速检测苜蓿轮枝菌，本研究选用苜蓿轮枝菌的特征序列扩增区域（sequence characterized amplified region（SCAR）marker）作为目标基因，设计了特异性引物Va-RPA-F/Va-RPA-R和CRISPR 引导RNA （Va-crRNA），建立了重组酶聚合酶等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a的快速检测方法。对该检测体系的反应时间、组分浓度等进行优化，结果显示苜蓿轮枝菌基因组DNA在39℃恒温条件下扩增30 min后，其扩增产物用基于CRISPR-Cas12a的荧光法和侧向流层析试纸条两种方法检测，可检测到10.6 pg 基因组DNA，其灵敏度与实时荧光定量PCR结果相当，加标回收实验结果证明本研究建立的方法可成功用于植物组织中苜蓿轮枝菌的快速检测。
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