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摘要
该文旨在研究胡椒碱对帕金森痴呆(Parkinson′s disease with dementia,PDD)模型小鼠小肠部位的作用机制。将96只无特定病原体级别的雄性C57BL/6小鼠随机分为8组:正常组,模型组,自噬抑制剂组(6-氨基-3-甲基嘌呤,3MA,30 mg·kg-1),自噬激活剂组(雷帕霉素,1 mg·kg-1),胡椒碱低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg-1)和美多巴组(112.5 mg·kg-1)。除正常组外,其他各组小鼠均皮下注射利血平(0.1 mg·kg-1),每48 h给药1次,持续40 d。此外,在给药第20天时,除正常组外,其余各组小鼠均再进行双侧颈总动脉阻断术,最终制备为PDD模型。同时,各组均给予相对应的药物治疗,每天1次,持续40 d。末次给药结束后,采用自主活动试验和热板试验观察小鼠的行为学变化;采用免疫组化法检测小肠组织中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)表达;免疫荧光法检测小肠组织中beclin-1、微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)和p62表达;苏木精-伊红染色法观察各组小肠组织的病理形态;酶联免疫吸附法检测小鼠组织β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、磷酸化tau蛋白(phospho tauprotein,p-tau)、乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小肠组织α-syn,TH,beclin-1,微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和p62的mRNA及mmu-miR-99a-5p表达。结果发现,与模型组比较,3MA组、胡椒碱各剂量组和美多巴组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著增加(P<0.05),3MA组、胡椒碱各剂量组和美多巴组的首次舔足时间缩短,APP,p-tau,IL-6,TNF-α,α-syn,beclin-1,LC3B和mmu-miR-99a-5p表达显著减少(P<0.05),雷帕霉素组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著减少(P<0.05),雷帕霉素组的APP,p-tau,IL-6,TNF-α,α-syn,beclin-1,LC3B和mmu-miR-99a-5p表达显著增加(P<0.05);与3MA组比较,胡椒碱低、中剂量组和雷帕霉素组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著减少(P<0.05),首次舔足时间显著延长,APP,p-tau,IL-6,TNF-α,α-syn,beclin-1,LC3B和mmu-miR-99a-5p表达显著增加(P<0.05);与美多巴组比较,胡椒碱低剂量组和雷帕霉素组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著减少(P<0.05),首次舔足时间显著延长,APP,p-tau,IL-6,TNF-α,α-syn,beclin-1,LC3B和mmu-miR-99a-5p表达显著增加(P<0.05)。此外,与正常组相比,模型组和雷帕霉素组的小鼠肠上皮细胞大量脱落,肠黏膜受损严重,小肠绒毛出现水肿及脱落现象;给药治疗干预后,3MA组、胡椒碱各剂量组和美多巴组的肠上皮细胞轻度受损,绒毛少量脱落。综上所述,胡椒碱对帕金森痴呆模型小鼠小肠部位有保护作用,表现为减少mmu-miR-99a-5p、促炎因子和自噬因子的表达,其减缓PDD病理症状的机制可能与抑制自噬有关。
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