CXCL1通过促进蛋白激酶B磷酸化导致bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞骨架收缩和通透性增加

作者：韩雨红; 董逸舒; 李雪蒙; 熊倩倩; 陈晓芬; 李柏青; 汪洪涛; 宋传旺; 吴凤娇^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(02): 117-123.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009566

• 脂多糖
• bEND.3脑微血管内皮细胞
• CXC趋化因子配体1(CXCL1)
• CXC趋化因子受体2(CXCR2)
• 脑内皮细胞
• 细胞骨架重排

目的 探讨脓毒症脑病炎症中CXC趋化因子配体1(CXCL1)及其受体CXC趋化因子受体2(CXCR2)对脑内皮细胞骨架重排和通透性的影响及其相关机制。方法 野生型小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立脓毒症脑病模型，ELISA检测全脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CXCL1含量。使用500 ng/m L LPS和200 ng/m L TNF-α刺激b END.3脑微血管内皮细胞后，Western blot法检测细胞CXCR2的表达。以150 ng/m L CXCL1刺激b END.3细胞，免疫荧光染色观察脑内皮细胞骨架纤维型肌动蛋白(F-actin)重排的变化。脑内皮细胞通透性实验中，将b END.3细胞随机分为PBS对照组、CXCL1组、CXCL1联合选择性CXCR2拮抗剂SB225002组，TranswellTM小室检测各组通透性变化情况。CXCL1刺激b END.3细胞后，Western blot法检测细胞中蛋白激酶B (AKT)和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达。结果 腹腔注射LPS导致小鼠全脑组织中TNF-α和CXCL1水平显著升高;LPS和TNF-α刺激可增高b END.3细胞CXCR2蛋白的表达。CXCL1刺激b END.3细胞使其细胞骨架收缩，细胞间隙形成增加，且细胞渗透性增加，而CXCR2拮抗剂SB225002预处理可显著抑制CXCL1引起的脑内皮细胞肌动蛋白应力纤维和细胞间隙的形成、以及通透性的增高，同时CXCL1(150 ng/m L)刺激使得脑内皮细胞AKT的磷酸化水平明显升高。结论 CXCL1通过AKT磷酸化激活引起脑内皮细胞骨架收缩、细胞通透性增加，CXCR2拮抗剂SB225002可有效抑制CXCL1诱导的细胞骨架收缩和通透性升高。

• 单位
  蚌埠医学院