Brevican基因敲除小鼠的制备

作者：韩晞; 董艳

来源：第二军医大学学报, 2011, (08): 818-821.

• brevican
• 基因敲除小鼠
• 胚胎干细胞
• 同源重组 brevican
• knockout mice
• embryonic stem cells
• homologous recombination

目的制备brevican基因敲除小鼠。方法采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体。线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子。PCR法鉴定小鼠的基因型。结果将PGK启动子指导的NEO表达框敲进Bcan第3外显子,敲除第3～8外显子序列,得到打靶载体,上游臂为2.4 kb,下游臂为4.8 kb。基因打靶后,得到双臂均发生正确同源重组的克隆数14个。利用阳性ES细胞克隆注射入囊胚,得到3只嵌合率大于50%的雄鼠,繁育得到6只Brevican-/-纯合子小鼠。结论利用同源重组方法...

• 单位
  复旦大学附属华山医院; 中国人民解放军第二军医大学