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摘要
草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)是一种致病力强，严重危害水产养殖业健康发展的病毒。免疫接种疫苗是预防GCRV的有效途径，而口服免疫接种对生活在水中的鱼类是一种理想的接种方式。GCRV衣壳蛋白VP7具有较好的免疫原性。霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit, CTB)是一种较好的黏膜佐剂。本研究采用PCR技术，将CTB基因和VP7基因进行柔性融合，获得1260 bp的CTB-VP7融合基因，构建重组表达质粒pET28a-CTB-VP7,转化大肠杆菌BL21 (DE3),获得了表达CTB-VP7融合蛋白的菌株。当采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导时，获得CTB-VP7融合蛋白的分子量约49 kDa,与预期的分子量大小一致。当IPTG浓度为0.08 mmol·L-1,诱导温度为37℃,诱导转速为100 r·min-1,诱导表达5.0 h时，CTB-VP7融合蛋白的表达量最大，达到2.45 mg·L-1。CTB-VP7融合蛋白在菌体中主要以包涵体的形式存在。在融合蛋白纯化时，洗脱缓冲液中咪唑浓度为200 mmol·L-1,目标蛋白纯度达96%。本研究通过基因合成和原核表达得到CTB-VP7融合蛋白，为进一步验证CTB-VP7融合蛋白能否作为抵抗GCRV的粘膜疫苗奠定了基础。
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