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摘要
目的在真核系统中表达全长人类免疫缺陷病毒1(human immunodeficiency virus 1, HIV-1)p24抗原, 鉴定其抗原性, 探讨其在HIV早期诊断中的价值。方法利用PCR技术分别扩增p24基因和DRVI信号肽基因, 通过融合PCR在p24基因前添加来自gp140质粒的DRVI信号肽序列, 并分别将其克隆至pDRVI1.0载体, 获得两种重组质粒pDRVI-p24和pDRVI-p24s。将重组质粒转染293F细胞, 通过SDS-PAGE检测p24蛋白的表达与分泌, 利用Ni-NTA金属螯合层析法和分子筛纯化p24s蛋白, 并利用免疫印迹法检测该蛋白质的抗原特异性。通过间接ELISA法进行HIV-1阳性小鼠和HIV-1阳性感染者血清的检测。结果成功构建了高效表达HIV-1 p24蛋白的真核表达系统, 细胞上清中可检测到明显的p24s蛋白分泌。经HIV-1阳性和阴性小鼠, 以及经临床验证的30份HIV-1阳性感染者和50份HIV阴性血清标本鉴定, 重组蛋白具有较高的检出特异性和敏感性。结论成功构建了HIV-1 p24抗原真核表达载体, 表达纯化的p24s抗原具有较好的抗原性, 初步建立了检测HIV-1的间接ELISA法, 并证明该检测法具有较高的特异性和灵敏度, 具有良好的应用前景。
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