二斑叶螨cDNA文库的构建及鉴定

作者：张道伟; 曾燕玲; 魏福伦; 周德贵

来源：广东农业科学, 2013, 40(10): 149-151.

DOI：10.3969/j.issn.1004-874X.2013.10.044

• 二斑叶螨
• cDNA文库
• 滴度
• 重组效率

为研究二斑叶螨发育相关基因的功能,利用TRIzol试剂提取二斑叶螨总RNA,通过SMART技术构建cDNA文库.利用SMART ⅣTM Oligonucleotide和CDSIII/3'PCR Primer为引物,在反转录酶作用下,合成cDNA第1链,利用LD-PCR方法合成cDNA第2链.合成的双链cDNA经酶切回收后,再连接pDNR-LIB载体,转化大肠杆菌感受态细胞Trans 5α,检验库容量和重组效率,并采用PCR方法检测插入cDNA片段的大小.结果表明,构建的二斑叶螨cDNA文库的库容量为3.54×106CFU/mL,重组效率达95.8％,插入片段长度在0.3～2.0kb之间.构建的二斑叶螨cDNA文库质量良好,能够为进一步研究二斑叶螨基因的功能奠定基础.

• 单位
  遵义师范学院; 广东省农业科学院