鼠IL-10基因腺病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达

作者：张文婷; 唐娟; 赵红梅; 游洁玉^*

来源：中国当代儿科杂志, 2019, 21(07): 708-712.

• 炎症性肠病
• IL-10基因
• 腺病毒载体
• 骨髓间充质干细胞
• 大鼠

目的构建携带鼠IL-10(rIL-10)基因重组腺病毒载体,并探讨其能否在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中稳定表达。方法 rIL-10引物经PCR扩增rIL-10 cDNA序列,将回收到的656 bp rIL-10 DNA片段克隆入pcDNA3.1载体中,构建pcDNA3.1-IL-10,将其与腺病毒载体共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,经测序及聚合酶链反应(PCR)鉴定重组是否成功;反复冻融裂解HEK293细胞,将获得的含rIL-10基因的病毒液感染MSCs,Western blot法检测rIL-10在MSCs中的表达。结果经测序及PCR验证,rIL-10基因腺病毒载体构建成功,病毒滴度达4×109 PFU/mL。含rIL-10基因的病毒液体外感染MSCs后,可检测到IL-10的表达。结论构建重组腺病毒能够介导rIL-10基因在MSCs中的稳定表达,为下一步基因移植治疗炎症性肠病提供基础。[中国当代儿科杂志,2019,21(7):708-712]

• 单位
  湖南省儿童医院; 湖南中医药大学