非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究

作者：李杰; 张星星; 郭晶; 张国武; 王晓婷; 李妍; 才学鹏; 孟庆玲; 乔军^*

来源：西南农业学报, 2019, 32(03): 684-699.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2019.3.036

• 非洲猪瘟病毒
• P30-54融合蛋白
• 杆状病毒表达系统
• 反应原性

【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30-54融合蛋白基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac1中,构建重组质粒pFastBac-P30-54;将重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌进行重组,经抗性与蓝白斑筛选得到杆状病毒重组质粒Bacmid-P30-54;将reBacmid-P30-54转染sf9细胞,获得重组杆状病毒reAcMNPV-P30-54。将获得的reAcMNPV-P30-54接种sf9细胞,待细胞出现CPE时收集细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)和SDS-PAGE进行分析重组蛋白的表达情况;通过Western blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】在重组杆状病毒中成功表达P30-54蛋白,该重组蛋白可与ASFV多克隆抗体发生免疫学反应。【结论】证实该重组蛋白具有良好的反应原性。

• 单位
  石河子大学; 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 动物科技学院