长链非编码RNA H19调控微小RNA-155在氯化锰诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

作者：刘萍萍; 庄建发; 纪荣佳; 王俊毅; 吴进; 陈大朝^*

来源：毒理学杂志, 2023, 37(04): 289-296.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2023.04.008

• H19
• 微小RNA-155
• 氯化锰
• SH-SY5Y细胞
• 炎症因子

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19调控微小RNA-155(miR-155)在氯化锰(MnCl2)诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用机制。方法 用MnCl2处理SH-SY5Y细胞并将H19过表达质粒(pcDNA3.1-H19)及阴性对照质粒(pcDNA3.1)、H19小干扰RNA(si-H19)及乱序无意义阴性对照(si-NC)、miR-155寡核苷酸模拟物(miR-155)及阴性对照(miR-NC)分别转染进细胞。采用四唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白免疫印迹(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌量，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测H19和miR-155表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证H19与miR-155的靶向调控关系。结果 用MnCl2(250、500和1 000μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h可明显降低细胞存活率、Bcl-2蛋白表达水平和H19表达水平；明显增加细胞凋亡率，Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平，IL-1β、IL-6和TNF-α分泌量，miR-155表达水平，且呈剂量依赖性(P<0.05)。H19靶向抑制miR-155的表达，H19过表达可逆转MnCl2对SH-SY5Y细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响(P<0.05),抑制H19表达或miR-155过表达可加剧MnCl2对SH-SY5Y细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响(P<0.05)。结论 MnCl2诱导SH-SY5Y细胞损伤可能与H19调控miR-155进而促进炎症反应有关。

• 单位
  厦门大学; 厦门大学附属东南医院