MicroRNA-155/Nrf2对体外培养雪旺细胞增殖和迁移的影响及作用机制

作者：赵飞; 姚忠军; 曹洪; 朱必涛; 张弥^*

来源：中国现代医学杂志, 2023, 33(02): 35-42.

• 坐骨神经慢性卡压损伤
• 雪旺细胞
• miR-155
• Nrf2
• 增殖和迁移

目的 探讨microRNA-155(miR-155)/Nrf2对雪旺细胞增殖和迁移的影响及作用机制，为坐骨神经慢性卡压损伤等临床诊断和治疗策略提供科学依据。方法 将大鼠雪旺细胞（RSC96）作为研究对象，转染miR-155 mimics、miR-155 inhibitor、si-Nrf2及其阴性对照质粒（miR-NC、inhibitor NC、si-NC）。为验证miR-155过表达/抑制质粒转染效果，探究miR-155对雪旺细胞增殖、迁移的影响，将细胞分为inhibitor NC组（细胞转染inhibitor NC质粒）、miR-155 inhibitor组（细胞转染miR-155 inhibitor质粒）、miR-NC组（细胞转染miR-NC质粒）、miR-155 mimics组（细胞转染miR-155 mimics质粒）。为了验证Nrf2沉默效果，将细胞分为si-NC组（细胞转染si-NC质粒）、si-Nrf2(1)组[细胞转染si-Nrf2(1)质粒]、si-Nrf2(2)组[细胞转染si-Nrf2(2)质粒]。为证实靶向Nrf2可实现miR-155对细胞增殖、迁移的影响和Nrf2、Ngf、Laminin mRNA相对表达量的调控作用，拟抑制miR-155表达的同时选取Nrf2沉默效果较好的质粒（si-Nrf2）转染细胞行挽救实验，探讨miR-155的作用是否会部分逆转，将细胞分为miR-155 inhibitor+si-NC组（细胞转染miR-155 inhibitor和si-NC质粒）、miR-155 inhibitor+si-Nrf2组（细胞转染miR-155 inhibitor和si-Nrf2质粒）。通过CCK-8法检测miR-155对细胞增殖的影响，Transwell实验检测细胞迁移情况，实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-155、神经生长因子（Ngf）、层粘连蛋白（Laminin）和核因子E2相关因子2(Nrf2)的基因水平，Western blotting检测Nrf2蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-155与Nrf2的结合关系。结果 miR-155 inhibitor组miR-155相对表达量较inhibitor NC组降低（P<0.05）,miR-155 mimics组较miR-NC组升高（P<0.05）。inhibitor NC组、miR-155 inhibitor组、miR-NC组、miR-155 mimics组0 h、24 h、48 h、72 h的吸光度值比较，经重复测量设计的方差分析，结果显示：(1)不同时间点的细胞增殖有差异（P <0.05）；(2)各组细胞增殖有差异（P <0.05）；(3)细胞增殖的变化趋势有差异（P <0.05）。miR-155 inhibitor组细胞迁移数较inhibitor NC组减少（P <0.05）,miR-155 mimics组较miR-NC组增加（P <0.05）。miR-155 inhibitor组Ngf、Laminin mRNA相对表达量较inhibitor NC组高（P <0.05）,miR-155 mimics组较miR-NC组低（P <0.05）。miR-155 inhibitor组Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量较inhibitor NC组升高（P <0.05）,miR-155 mimics组较miR-NC组降低（P <0.05）。miR-155 inhibitor野生型Nrf2细胞荧光素酶活性较inhibitor NC组升高（P <0.05）,miR-155 mimics组较miR-NC组降低（P <0.05）。si-Nrf2(1)组和si-Nrf2(2)组沉默效果验证实验中Nrf2 mRNA相对表达量较si-NC组降低（P <0.05），且si-Nrf2(2)组效果更好。miR-155 inhibitor组挽救实验中Nrf2 mRNA相对表达量较inhibitor NC组高（P<0.05）,miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组低（P<0.05）。miR-155 inhibitor组挽救实验中细胞吸光度值较inhibitor NC组高（P <0.05）,miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组低（P <0.05）。miR-155 inhibitor组挽救实验中细胞迁移数量较inhibitor NC组增加（P <0.05）,miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组减少（P <0.05）。miR-155 inhibitor组挽救实验中Ngf、Laminin mRNA相对表达量较inhibitor NC组高（P <0.05）,miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组低（P <0.05）。结论 miR-155通过调控Nrf2通路活化，抑制雪旺细胞的增殖和迁移。

• 单位
  湖北医药学院; 湖北医药学院附属太和医院