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摘要
转座酶因其能够插入目的片段的能力正受到越来越多的关注,经过改造的高活性转座酶可用于标记DNA具有较大的应用价值,如ATAC-seq (Assay for transposase-accessible chromatin using sequencing)以及TrAC-looping (Transposase-mediated analysis of chromatin looping)等染色质高级结构捕获实验,使用高活性转座酶为染色质开放区DNA或存在染色质相互作用的片段加上标记从而分离出目的片段。天然转座酶普遍活性较低,缺乏实际应用价值,而经过改造的高活性转座酶因其可能导致的致死突变,对宿主具有较大毒性,难以制备。本研究优化了高活性转座酶Tn5的原核表达以及纯化方法,将已转化pet15b His6Tn5质粒的改良型工程菌BL21-Gold (DE3)以及毒性蛋白诱导条件进行原核表达,借助高活性转座酶Tn5带有的His tag标签进行纯化,通过Western blotting鉴定了纯化所得蛋白,并使用考马斯亮蓝染色测定了目的蛋白浓度采取在标准反应条件下与斑马鱼ZF4细胞基因组DNA反应的方法,测试了纯化所得Tn5的活性。本研究为进一步探测ZF4细胞基因组的三维结构提供了研究基础。
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