严重急性呼吸综合征冠状病毒2核衣壳蛋白的制备及其初步应用

作者：李光; 任仲^*; 胡道奇; 刘汨; ***; 张玉玲; 周松辉; 方晓兰; 李卫平; 滕淑静

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(02): 184-188.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003544

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 核衣壳蛋白
• 包涵体
• 复性
• 纯化
• 免疫胶体金检测试剂

目的在大肠埃希菌中表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白),并进行纯化,用于制备SARS-CoV-2检测试剂。方法将含N蛋白基因的重组质粒pET28a转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达N蛋白,考察Ni柱亲和层析与SP强阳离子交换层析和CM弱阳离子交换层析对重组N蛋白的纯化效率,制备胶体金免疫检测试剂并检测灭活血清。结果表达的重组N蛋白相对分子质量约49 000,表达量约占包涵体总蛋白的30%。Ni2+亲和层析对重组N蛋白的选择性较低,通过强阳离子交换与弱阳离子交换两步层析,实现了重组N蛋白在色谱柱上的复性和纯化,纯度大于90%。以此制备的免疫胶体金检测试剂可初步用于血清中相应抗体的检测。结论复性后的重组N蛋白,具有较好的生物活性,可用于诊断试剂开发,复性工艺对其他重组蛋白质的纯化具有借鉴意义。

• 单位
  湖南康润药业股份有限公司; 岳阳职业技术学院