TSSC3通过调控PI3K/Akt-细胞失巢凋亡途径抑制肾小管上皮的纤维化表型

作者：刘兴红; 陈雁; 肖菲; 戴欢子^*

来源：陆军军医大学学报, 2022, 44(05): 421-431.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202107152

• 肾纤维化
• TSSC3
• TGF-β1
• HK-2细胞
• PI3K/Akt信号通路

目的 研究印记基因STF cDNA 3(TSSC3)对肾脏来源的肌成纤维细胞(myofibroblast, MyoFb)抗失巢凋亡和促纤维化能力的影响及其相关机制。方法 使用TGF-β1处理人肾近曲小管上皮细胞系HK-2诱导其成为MyoFb,并采用超低粘附板悬浮培养法以及外源性RGD多肽培养法建立失巢凋亡模型；使用含或不含TGF-β1的细胞培养基处理稳定转染过表达TSSC3慢病毒的HK-2细胞，采用流式细胞术及CCK-8检测TSSC3对MyoFb及HK-2细胞失巢凋亡、增殖的影响；qRT-PCR及Western blot检测PI3K/AKT介导的凋亡途径以及纤维化相关分子mRNA及蛋白表达情况。结果 TGF-β1明显增加HK-2中α-SMA的表达、降低Villin的表达(P<0.05),且具有时间依赖性，表明TGF-β1成功诱导HK-2细胞成为MyoFb,且MyoFb的失巢凋亡率明显低于HK-2细胞(P<0.01),表明TGF-β1诱导的MyoFb具有失巢凋亡抵抗的能力。相对于HK-2细胞，MyoFb增殖率明显增加、失巢凋亡率明显降低(P<0.01),PI3K/AKT通路抑制剂LY204002则部分逆转了上述改变。过表达TSSC3明显抑制失巢凋亡模型中MyoFb中p-PI3K、p-AKT的表达，增加cleaved-caspase 3的表达。过表达TSSC3明显抑制MyoFb和HK-2细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白、PAI-1、MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白的表达。结论 TSSC3通过下调PI3K/Akt途径抑制肾脏来源MyoFb的失巢凋亡抵抗及促纤维化的能力。